哺乳动物细胞蛋白表达纯化服务实验报告案例？国内有哪些生物研究所

本文目录

• 哺乳动物细胞蛋白表达纯化服务实验报告案例
• 国内有哪些生物研究所
• 武陟碧云天生物科技有限公司怎么样
• 陕西碧云天生物工程有限公司怎么样
• 薄膜手套的注册证号和生产备案号一样吗
• 目前国内较大的生物试剂公司有哪些
• 替代碧云天的国产品牌

哺乳动物细胞蛋白表达纯化服务实验报告案例

本案例基于pAZV5分泌表达体系，使用基因合成的方法构建pAZV5表达载体，瞬时转染HEK293悬浮细胞，通过SDS-PAGE和 Western Blot检测蛋白的表达情况，扩大培养收集细胞上清并通过Ni柱的亲和纯化获得目的蛋白。

一、实验设计 

我们分析客户提供的Target-Gene序列，整个蛋白序列呈亲水性，自身不带信号肽序列，因此我们设计思路为：

1.1、以客户的基因序列翻译的蛋白序列为源模板，通过密码子优化一套最适宜HEK293细胞系的基因序列。

1.2、推荐客户使用钟鼎生物的自主载体pAZ-V5载体来进行实验，利用载体自带的V5信号肽序列帮助蛋白穿膜分泌表达至胞外，为了保持蛋白的N端活性，我们在C端添加6XHis-Tag便于重组蛋白的检测和亲和纯化。

依据上述设计思路，以基因合成的方式构建pAZ-V5表达质粒，经过测序和酶切验证无误后，挑取无内毒素的质粒。转染200ml HEK293细胞，通过western blot检测蛋白表达情况，确认蛋白表达情况，再通过Ni-resin亲和纯化获得80%以上目的蛋白。

二、试剂和耗材

名称 公司 名称 公司

DMEM 高糖、DMEM低糖、胎牛血清、胰蛋白酶、opti SFM、转染试剂Invitrogen（Gibco）无内毒素质粒中提试剂盒、LAL内毒素检测试剂、基础化学试剂、低熔点琼脂糖Sigma公司

抽提试剂盒Axygen公司PCR试剂盒IO-RAD公司

六孔板、细胞培养瓶、离心管corning公司PCR反应管Fisher公司

DNA胶纯化试剂盒、质粒小提试剂盒AXYGEN公司Agarose上海基因公司

中性红碧云天生物公司其它试剂均为国产分析纯

二、主要实验仪器

仪器名称 公司 仪器名称 公司 仪器名称 公司

Allegra 21R 台式高速冷冻离心机美国BECKMAN公司台式高速离心机德国SORVAL公司Mini Protean II垂直平板电泳系统、Gel Doc2000成像系统、水平电泳系统美国BIO-RAD公司

PTC-200基因扩增仪美国MJ Research公司320-S pH计美国Mettler Toledo公司AR5120电子天平美国AHOM S公司

MultiTemp III 恒温水浴锅、Hofer ΜV-25紫外透射仪美国Amersham Pharmacia公司雪花状制冰机日本SANYO公司JY92-2D超声波细胞粉碎机中国新芝科器研究所

蛋白核酸检测仪南京大学普阳科学仪器厂NANODROP2000美国Thermo公司超净工作台中国苏净集团

四、蛋白性质分析

4.1 客户提供原始基因序列

GTGGGGTGCT******NNNNNNNNNNNNNN---------涉及客户研究内容，不予显示----NNNNNNNNNNNNNNN*******CTTCTCCCTT

4.2 编码的蛋白序列如下（理论分子量41.18KD，理论等电点PI6.73）

GCSVDFSK******NNNNNNNNNNNNNN---------涉及客户研究内容，不予显示----NNNNNNNNNNNNNNN*******TAGSTDHMDHFSL

4.3 稀有密码子序列分析如下图所示（红色：使用频率低于10% 灰色：使用频率低于20%，绿色为正常频率密码子）

4.4 蛋白序列跨膜及亲疏水性分析

4.5 信号肽预测

综上所述：

1、蛋白理论分子量为 41KD，属于正常分子量范围，较适宜表达。

2、通过对基因密码子使用频率的分析，如果以293细胞为表达宿主，基因序列上使用频率低于20%的密码子X个，使用频率低于10%的密码子X个，优化后通过基因合成方式获得目的基因。

3、通过对蛋白的跨膜结构和亲疏水性分析，蛋白整体呈亲水性，但从473AA之后，蛋白存在典型的跨膜结构，建议去除后表达以提高成功率。

4、目的蛋白自身无信号肽，添加GP67信号肽便于蛋白分泌表达。为了纯化方便，考虑在C端添加His标签。

五、实验方法及实验结果

5.1 pAZ-V5表达质粒构建

采用基于PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法合成target-gene基因，双酶切连接至pAZ-V5载体的Afl II和Xba I之间；将获得的重组质粒转入TOP10克隆菌株，挑取阳性克隆子测序，测序结果拼接如下所示，单划线区为目的基因基因区域。紫色区域为酶切位点，黄色区域为v5信号肽，绿色区域为6XHis标签；

T A G C A G A G C T C T C T G G C T A C T A G A G A A C C C A C T G C T T A C T G G C T T A T C G A A A T T A A T A C G A C T C A C T A T A G G G A G A C C C A A G C T G G C T A G C G T T T A A A C T T A A G C * * X 3 * * * * N N N N N N---略-----N N N N N N * * T G A G T A G G C A C C A C C A C C A C C A C C A C T G A C T C T A G A G G 

5.2 使用Chromas软件查看测序峰图文件，截取部分序列示例如下：

5.3 pAZ-V5载体图如下所示：
表达条件优化

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国内有哪些生物研究所

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链让族闹接：https://pan.baidu.com/s/18aEZUOVmZPQCM5x2dqnWgw

武陟碧云天生物科技有限公司怎么样

武陟碧云天生物科技有限公司是2017-08-31在河南省焦作市武陟县注册成立的有限责任公司(自然人投资或控股)，注册地址位于武陟县谢旗营镇扈庄村北地。

武陟碧云天生物科技有限公司的统一社会信用代码/注册号是91410823MA44BGR54L，企业法人闫军，目前企业处于开业状态。

武陟碧云天生物科技有限公司的经营范围是：饲料、饲料添加剂、饲料原料的加工、销售。本省范围内，当前企业的注册资本属于一般。

通过百度企业信用查看武陟碧云天生物科技有限公司更多信息和资讯。

陕西碧云天生物工程有限公司怎么样

陕西碧云天生物工程有限公司是2007-08-21在陕西省西安市碑林区注册成立的有限责任公司(自然人投资或控股)，注册地址位于西安市碑林区体育馆东路188号10209室。

陕西碧云天生物工程有限公司的统一社会信用代码/注册号是91610103663174343P，企业法人程小芹，目前企业处于开业状态。

陕西碧云天生团春物工程有限公司的经营范围是：许可经营项目：预包装食品、散装食品的批发及零售。（凭许可证在有效期内经营，未经许可不得经营） 一般经营项目：茶粉、粉茶、茶制品、袋泡茶、中草药的研发及相关技术咨询服务；生物制品、医药制品、保健食品有研发及技术咨询、技术转让；保健扒液用品塌此耐、消毒用品、卫生用品、化妆品、一、二类医疗器械有销售、研发及技术咨询、技术转让。（以上范围除法律法规规定的前置许可项目）.。在陕西省，相近经营范围的公司总注册资本为1139258万元，主要资本集中在 5000万以上 和 100-1000万 规模的企业中，共1922家。本省范围内，当前企业的注册资本属于良好。

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薄膜手套的注册证号和生产备案号一样吗

不一样。薄膜手套隶属于碧云天生物技术有闭伍限公司，根据查询碧云轿宏或天生物技术有限公司显示，薄膜手套的注册证号和生产备案号是不一样的。经营范围：许可项目：第二类医疗器绝穗械生产；第三类医疗器械生产。

目前国内较大的生物试剂公司有哪些

国内较大的生物试剂公司有：中国生物技术股份有限公司、北京天坛生物制品股份有限公司、科兴控股生物技术有限公司、华兰生物工程股份有限公司、中国生物制品有限公司。差带

1、中国生物技术股份有限公司

自中华人民共和国成立以来，中生股份所属生物制品企业一直承担着为我国预防、控制、消灭传染病用生物制品的生产供应任务。拥有强大的产业化能力，在六大主要城市建有生产基地，在我国可以生产的41个疫苗品种中，中生股份可生产35种，年产量超过7亿剂次。

2、北京天坛生物制品股份有限公司

公司是生物制品研究和生产基地之一，是央企中国生物技术集团公司下辖的的一家上市公司。 公司主要从事疫苗、血液制剂、诊断用品等生物制品的研发、生产和销售。

主导产品包括重组酵母乙型肝炎疫苗、风疹活疫苗、骨髓灰质炎疫苗、乙型脑炎灭活疫苗、麻风二联疫苗（MR）、各种诊断试剂等20多个品种，主营产品占有国内50%以上的市场份额。

3、科兴控股生物技术有限公司

北京科兴生物制品迟李有限公司是由科兴控股（香港）有限公司、未名生物医药有限公司合资组建的生物高新技术企业。公司于2001年在北京中关村国家自主创新示范区注册成立。目前北京科兴通过科兴控股生物技术有限公司在纳斯达克全球精选市场上市，是唯一一家在北美上市的中国虚旦芦疫苗企业。

4、华兰生物工程股份有限公司

华兰生物工程股份有限公司华兰生物工程股份有限公司（前身为华兰生物工程有限公司）成立于1992年，是从事血液制品研发和生产的国家级重点高新技术企业，并于1998年首家通过了血液制品行业的GMP认证。

5、中国生物制品有限公司

中国生物技术集团公司成立于1989年（原名中国生物制品总公司，2003年8月更为现名，下称中生集团），原为国务院国有资产监督管理委员会管理的国有重要骨干企业。

替代碧云天的国产品牌

瑞洋。瑞洋和碧云天巧雀是一个层次，所以能替代碧云天的国产品牌是瑞洋，碧云天生物创办于2001年，致力于自主研告宽梁发和生产生物、医学研究用袜运试剂、试剂盒、耗材和仪器等。